CRISPR/Cas9系统在本氏烟草基因敲除中的应用研究

CRISPR(clustered regulatory interspersed short palindromic repeat)/Cas9 (CRISPR associated proteins)是源于原核生物的一种获得性免疫系统，广泛应用于细菌、真菌、动物和植物的基因编辑研究中。本研究是以GFP(Green Fluorescent Protein)转基因本氏烟草16C(16C transgenic Nicotiana benthamiana, 16C-NB)为材料，利用CRISPR/Cas9技术实现对其GFP基因的编辑工作，使用PCR-RE(polymerase chain reaction-Restriction enzyme)的方法检测了突变体，建立了本氏烟草CRISPR/Cas9基因敲除瞬时表达系统，进而探讨了CRISPR/Cas9系统在植物基因敲除中的应用。在本研究中，采用In-Fusion克隆技术获得了操作性强的中间载体，针对靶基因GFP设计特定靶位点并进行了基因突变实验。为将来开展其它植物内源基因的生物学功能研究奠定了基础。