小黑麦ISSR反应体系的建立与优化

建立小黑麦最佳ISSR-PCR反应体系，可为小黑麦种质资源遗传多样性、遗传图谱、基因定位等进行分析与定位、提供理论依据及技术参考。试验采取先正交设计后单因素的试验方法，对影响小黑麦ISSR-PCR反应体系中Mg2+的浓度、dNTPs的浓度、引物的浓度、Taq DNA 聚合酶的浓度、以及退火温度和循环次数进行摸索与优化。得到最优反应体系(20 μl)：1.9 mmol/L的Mg2+，0.2 mmol/L的dNTPs，0.65 μmol/L的引物，2 U的Taq DNA聚合酶。最佳引物UBC807的最适退火温度为52.3℃。PCR反应程序：首先94℃预变性5 min；其次94℃变性30 s，52.3℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；最后72℃再延伸7 min。