大赖草ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

为了建立大赖草最佳的ISSR-PCR反应体系，以大赖草基因组DNA为模板，利用正交试验设计和单因子实验相结合的方法，对影响大赖草ISSR-PCR反应的各个因素( 模板、dNTPs及引物等)进行优化试验，同时筛选出扩增条带清晰、稳定性好的ISSR引物并确定其退火温度。结果表明，大赖草的ISSR-PCR的优化反应体系最终确定为：在25 μL的反应体系中，Mg2+2.5 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L、引物0.4 µmol/L、DNA 模板50 ng/µl 和Taq DNA 聚合酶1.0 U。体系验证试验表明该体系稳定、可靠，另外筛选出10条较好的引物，可用于后续的大赖草遗传多样性分析及亲缘关系分析、基因定位与克隆、连锁图谱构建等方面的研究，并对其它近缘作物有指导意义。